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技术文章 / article
ATCC细胞冷冻保存方法
原载自：www.yinghetongdai.com[技术资料频道] 2018-02-24 浏览次数：2389
ATCC细胞通常保存在冻存管中用干冰运输，或是在培养瓶中常温运输。但对于中国客户，由于运输时间稍长，都是采用干冰运输的方式。
在收到冻存细胞后，很重要的一点是迅速解冻使其立即复苏并除去DMSO，然后将它们放置到培养基中。如果做不到上面这点，需将细胞存储在液氮中（-130℃以下）。不要将冻存细胞储存在高于-130℃的温度下，这会使细胞存活率迅速下降。
ATCC细胞注意事项：
（1）欲冷冻保存之细胞应在生长良好（logphase）且存活率高之状态，约为80–90％致密度。
（2）冷冻前检测细胞是否仍保有其*性质，例如hybridoma应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。
（3）注意冷冻保护剂之品质。DMSO应为试剂级等级，无菌且无色（以0.22micron FGLP flon过滤或是直接购买无菌产品，如Sigma D-2650），以5～10ml小体积分装，4℃避光保存，勿作多次解冻。Glycerol亦应为试剂级等级，以高压蒸汽灭菌后避光保存。在开启后一年内使用，因长期储存后对细胞会有毒性。
ATCC细胞冷冻保存方法：
（1）传统方法：冷存管置于4℃10分钟→ -20℃30分钟→ -80℃16～18小时（或隔夜）→液氮槽vaporphase长期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
（2）程序降温：利用已设定程序的等速降温机以-1～-3℃/分钟之速度由室温降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。
